Читать онлайн «Применение современных молекулярно-биологических методов для поиска и клонирования полноразмерных нуклеотидных последовательностей кДНК: Учебное пособие»

Министерство образования и науки Российской Федерации НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЯДЕРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ «МИФИ» Применение современных молекулярно-биологических методов для поиска и клонирования полноразмерных нуклеотидных последовательностей кДНК Рекомендовано УМО «Ядерные физика и технологии» в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений МОСКВА 2011 УДК 577. 3(07) ББК 28. 05я7 У93 Применение современных молекулярно-биологических методов для поиска и клонирования полноразмерных нуклеотидных последовательностей кДНК: Учебное пособие. М. : НИЯУ МИФИ, 2011. – 88 с. Авторы: Ребриков Д. В. – ЗАО «НПФ ДНК-Технология» Коростин Д. О. – ЗАО «НПФ ДНК-Технология» Ушаков В. Л. – НИЯУ «МИФИ» Барсова Е. В. – ЗАО «Евроген» Лукьянов С. А. – ЗАО «Евроген» Содержит материал по разделам молекулярной биохимической физики, связанным с биотехнологиями, методами генной инженерии и физико-химическими методами исследования биологических молекул: ДНК, РНК, белков. Предназначено для студентов 3-го и 4-го курсов НИЯУ МИФИ специальностей “Медицинская физика” и “Радиационная безопасность человека и охрана окружающей среды”, выполняющих цикл работ по курсам «Медицинская биохимия», «Физхимия биополимеров», «Молекулярная биология», «Системы регуляции организма» и «Физические методы исследования вещества», а также студентов- биофизиков и аспирантов, специализирующихся в области медицинской и биологической физики, молекулярной биологии, генетики, вирусологии и смежных специальностей. Подготовлено в рамках Программы создания и развития НИЯУ «МИФИ» Рецензент д-р биол. наук, проф. С. В. Машко © Национальный исследовательский ISBN 978-5-7262-1481-8 ядерный университет «МИФИ», 2011 2  Содержание Введение 5 Общие рекомендации и замечания 5 Основные задачи практикума 6 1. Необходимые реактивы и оборудование 9 1. 1. Компоненты, входящие в Набор для практикума (Евроген) 9 1. 2. Необходимые реактивы, не включенные в Набор для практикума 11 1. 3. Оборудование 13 1. 4. Расходные материалы 13 2. Теоретическая часть 14 2. 1. Выделение РНК (задача 1) 15 2. 2. Оценка качества суммарной РНК (задача 1) 16 2. 3. Синтез кДНК на матрице суммарной РНК (задача 2) 17 2. 4. Выявление 3’- и 5’-концевых фрагментов целевых транскриптов (задача 3) 20 2. 4. 1. Амплификация 3’-концевых фрагментов кДНК, 3’-Race 20 2. 4. 2. Nested ПЦР и Step-out ПЦР 23 2. 4. 3. Дизайн вырожденных праймеров 26 2. 4. 4.