Читать онлайн «Биохимия белков: Методические указания к лабораторным занятиям по биологической химии для студентов II курса медицинского факультета»

Петрозаводский государственный университет БИОХИМИЯ БЕЛКОВ Методические указания к лабораторным занятиям по биологической химии для студентов II курса медицинского факультета Петрозаводск 1999 Рассмотрены и рекомендованы к печати на заседании редакционной комиссии по отрасли науки и техники “биология” 25 мая 1999 г. Напечатаны по решению редакционно-издательского совета университета Составители: М. Н. Яковлева, кандидат биологических наук, В. В. Осташкова, кандидат биологических наук. Предисловие Настоящие методические указания содержат лабораторные работы по разделу “Биохимия белков”, выполняемые студентами II курса медицинского факультета в процессе изучения биологической химии. На лабораторных занятиях студенты овладевают современными методами экспериментальных исследований, закрепляют теоретические знания, полученные на лекциях, анализируют результаты. В каждой лабораторной работе излагаются принцип метода, ход эксперимента, советы по оформлению результатов и правила по технике безопасности. РАБОТА 1. ЦВЕТНЫЕ РЕАКЦИИ НА БЕЛКИ Цветные реакции на белки являются качественными реакциями, обусловленными специфическими группами − радикалами. Некоторые из таких реакций широко используются в биохимической практике для изучения структуры и аминокислотного состава белков, их количественного определения. 1. БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ (на обнаружение пептидных связей в белках) Белки (пептиды) в щелочном растворе в присутствии солей меди (II) образуют комплексные ее соединения, окрашенные в сине-фиолетовый или красно-фиолетовый цвет. Для пептидной (амидной) группы характерна лактам- лактимная таутомерия: В щелочной среде преобладающая лактимная (енольная) форма полипептида взаимодействует с медью с образованием стабильного окрашенного комплекса: Ход работы. К 1 мл 1% раствора белка (желатина, яичного белка или сывороточного альбумина) добавляют 1 мл 10% раствора щелочи (NaOH или KOH) и 1 каплю 1% раствора сульфата меди. Появляется сине-фиолетовое или красно- фиолетовое окрашивание. 2. НИНГИДРИНОВАЯ РЕАКЦИЯ (на аминогруппу, находящуюся в α-положении) Белки, полипептиды и свободные α-аминокислоты при нагревании реагируют с нингидрином (трикетогидринденгид- ратом) с образованием продукта конденсации, окрашенного в фиолетовый цвет: Ход работы. К 1 мл 1% раствора белка прибавляют 0,5 мл 0,5% раствора нингидрина и нагревают до кипения. Появляется фиолетово-синее окрашивание. Проделывают эту реакцию с раствором аминокислоты, взяв вместо раствора белка 1% раствор глицина. Сравнить полученные результаты и сделать вывод. 3. РЕАКЦИЯ САКАГУЧИ (на аргинин) Белки, содержащие аргинин, в присутствии щелочи дают красное окрашивание с гипобромитом и α-нафтолом. Гуанидиновая группа аргинина окисляется гипобромитом, и 2 окисленный аргинин при взаимодействии с α-нафтолом образует продукт конденсации красного цвета: Ход работы.